CYP11B2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405281-ACT

CYP11B2 kodiert die Aldosteron-Synthase, ein mitochondriales Cytochrom‑P450‑Enzym, das die abschließenden Oxidationsschritte der Aldosteronbiosynthese aus Deoxycorticosteron katalysiert. Diese steroidogene Aktivität verknüpft den Cholesterinstoffwechsel, den mitochondrialen Redoxtransfer und die Signalübertragung in der Zona glomerulosa der Nebenniere und koppelt damit die Elektrolythomöostase an die endokrine Regulation. Die Expression von CYP11B2 wird streng durch Angiotensin II, Kalium und cAMP‑abhängige Signalwege gesteuert, die steroidogene Akutregulationsprozesse und Transkriptionsprogramme modulieren. Eine fehlregulierte CYP11B2‑Aktivität oder ‑Expression ist mit veränderter Mineralokortikoidproduktion assoziiert und wird häufig im Kontext der adrenalen Steroidogenese, hypertonieassoziierter endokriner Phänotypen und in Forschungsmodellen zur Nebennierenneoplasie untersucht.

CYP11B2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CYP11B2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CYP11B2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CYP11B2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CYP11B2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CYP11B2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CYP11B2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CYP11B2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CYP11B2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CYP11B2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.