CYP11A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401269-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP11A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP11A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP11A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP11A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP11A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401269-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP11A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401269-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP11A1 kodiert das mitochondriale Cytochrom‑P450‑Seitenkettenspaltungsenzym (P450scc), das die Umwandlung von Cholesterin zu Pregnenolon katalysiert – den ersten und geschwindigkeitsbestimmenden Schritt der Biosynthese von Steroidhormonen. Diese Reaktion leitet die Produktion von Glukokortikoiden, Mineralokortikoiden und Sexualsteroiden ein und ist mit dem mitochondrialen Cholesterintransport sowie Redox‑Partnerwegen unter Beteiligung von Ferredoxin und Ferredoxin‑Reduktase verknüpft. Die Aktivität von CYP11A1 ist zentral für steroidogene Programme in der Nebennierenrinde und in Gonadengeweben und steht in Zusammenhang mit der endokrinen Homöostase und zellulären Differenzierungszuständen. Eine veränderte Expression oder Funktion von CYP11A1 wird mit angeborenen Störungen der Steroidbiosynthese, Phänotypen einer Nebenniereninsuffizienz sowie einer fehlregulierten steroidogenen Signalübertragung in Modellen für Reproduktions‑ und Nebennierenerkrankungen in Verbindung gebracht.
CYP11A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP11A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP11A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP11A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP11A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.