Plasmide CRISPR d'Activation (h) cyclin G1: sc-402045-ACT

CCNG1 code la cycline G1, une cycline atypique qui intègre les signaux de stress au contrôle du cycle cellulaire et à la régulation transcriptionnelle. La cycline G1 est fortement associée aux réponses aux dommages de l’ADN dépendantes de p53, en modulant le comportement des points de contrôle et en influençant la prolifération, l’apoptose et l’homéostasie cellulaire via des interactions avec des complexes de phosphatases et des circuits régulateurs associés à l’ubiquitine. Une expression altérée de CCNG1 a été rapportée dans de nombreux contextes tumoraux et est fréquemment étudiée comme un nœud reliant le stress génotoxique, le contrôle de la croissance et le remodelage des voies oncogéniques. En tant que régulateur humain du cycle cellulaire sensible aux signaux environnementaux et intracellulaires, la cycline G1 constitue une cible accessible pour disséquer les interactions entre les voies de réparation de l’ADN, la signalisation des checkpoints et les programmes transcriptionnels adaptatifs.

cyclin G1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCNG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cyclin G1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCNG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCNG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cyclin G1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCNG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cyclin G1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cyclin G1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CCNG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.