Plasmide Double Nickase (h) cyclin F: sc-401505-NIC

CCNF code la cycline F, une protéine à domaine F-box qui constitue le composant de reconnaissance des substrats du complexe ligase E3 d’ubiquitine de type SCF (SKP1–CUL1–F-box). Contrairement aux cyclines canoniques, la cycline F n’active pas les CDK ; elle contrôle plutôt le renouvellement des protéines afin de coordonner la progression du cycle cellulaire, la fidélité de la réplication de l’ADN et la stabilité du génome via une protéolyse dépendante de l’ubiquitine. Les voies régulées par CCNF recoupent la signalisation des checkpoints et la réponse aux dommages de l’ADN, influençant l’homéostasie des centrosomes et les conséquences du stress réplicatif. Des études sur la neurodégénérescence et l’instabilité génomique associée au cancer ont relié la dérégulation ou des mutations de CCNF à une protéostase altérée et à une régulation du cycle cellulaire perturbée.

cyclin F Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CCNF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CCNF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CCNF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CCNF.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.