Plasmide Double Nickase (h) cyclin A: sc-400119-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) cyclin A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide cyclin A Double Nickase (h) et le plasmide cyclin A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CCNA2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: cyclin A Antibody (BF683): sc-239
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) cyclin A | sc-400119-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) cyclin A | sc-400119-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCNA2 code la cycline A, un régulateur central de la progression du cycle cellulaire qui coordonne l’activité des CDK pendant la phase S et lors de la transition G2/M. Les complexes cycline A–CDK2 et cycline A–CDK1 modulent l’initiation des origines de réplication de l’ADN, la duplication des centrosomes et la signalisation des points de contrôle afin d’assurer une duplication fidèle du génome et l’entrée en mitose. L’expression de CCNA2 est étroitement contrôlée par les programmes transcriptionnels dépendants d’E2F et par la protéolyse médiée par l’ubiquitine via l’APC/C, reliant l’abondance de la cycline A au stress réplicatif et aux réponses aux dommages de l’ADN. Une activité dérégulée de CCNA2 est fréquemment associée à un contrôle altéré de la prolifération et à une instabilité génomique, ce qui en fait une cible récurrente dans les études des circuits oncogéniques du cycle cellulaire et des aberrations chromosomiques.
cyclin A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CCNA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CCNA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CCNA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CCNA2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.