CUL-4A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401967

Visão geral

CUL4A codifica a cullin-4A, um arcabouço central do complexo ligase de ubiquitina E3 CRL4, que coordena a ubiquitinação e a degradação proteassomal de proteínas que governam a replicação do DNA, a dinâmica da cromatina e a progressão do ciclo celular. Ao atuar em parceria com proteínas adaptadoras como a DDB1 e múltiplos receptores de substrato DCAF, a CUL-4A regula processos como o reparo por excisão de nucleotídeos, o licenciamento da replicação e as respostas a danos no DNA induzidos por UV. A ruptura da proteostase dependente de CUL4A pode comprometer a estabilidade genômica e o controle de checkpoints, associando a atividade alterada do CRL4 a fenótipos relacionados ao câncer e a outros distúrbios que envolvem reparo de DNA defeituoso. Como um nó central na sinalização mediada por ubiquitina, a CUL-4A é frequentemente estudada em vias que acoplam a regulação da cromatina ao estresse replicativo e ao controle transcricional.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CUL-4A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CUL4A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CUL4A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CUL4A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CUL-4A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CUL4A para a investigação da sinalização de CUL-4A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CUL4A críticos para a função CUL-4A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CUL4A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CUL-4A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CUL-4A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CUL4A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CUL-4A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CUL-4A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CUL4A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CUL4A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.