CTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417472

概要

SLC25A1はミトコンドリアのクエン酸トランスポータータンパク質（CTP）をコードしており、内膜に存在するキャリアとしてクエン酸／イソクエン酸とリンゴ酸を交換し、ミトコンドリア代謝と細胞質の生合成プログラムを結び付けます。CTPは、ATP-クエン酸リアーゼ依存的なアセチルCoA産生のためにクエン酸を細胞質へ輸送することで、新規脂質合成、タンパク質のアセチル化、エピジェネティック制御を支えると同時に、下流のNADPH産生経路を介して酸化還元バランスにも影響します。SLC25A1の活性は、TCA回路、解糖系、アナプレロティックフラックスを含む中心炭素代謝と統合され、栄養状態やミトコンドリアストレスに対する細胞応答を形作ります。クエン酸輸送の破綻は、がん、神経発達障害、炎症シグナル伝達などの文脈で観察される代謝リモデリングの変化と関連しており、SLC25A1はミトコンドリア—細胞質間クロストークの機構研究に有用な要所（ノード）となります。

CTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC25A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC25A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC25A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CTPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CTPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC25A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CTPの機能に不可欠なSLC25A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC25A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC25A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CTP HDRプラスミド（h）および CTP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC25A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC25A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。