CTH Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430767-ACT

O gene **Cth** de camundongo codifica a **cistationina gama-liase (CTH)**, uma enzima dependente de fosfato de piridoxal da via de **transsulfuração** que converte cistationina em **cisteína**, **α-cetobutirato** e **amônia**, além de contribuir para a produção celular de **sulfeto de hidrogênio (H₂S)**. Ao regular a disponibilidade de cisteína e o tamponamento redox, a CTH influencia o metabolismo da **glutationa**, as respostas ao **estresse oxidativo**, a função mitocondrial e a **homeostase metabólica**. Alterações na atividade da CTH têm sido associadas a perturbações no metabolismo de aminoácidos sulfurados e na sinalização dependente de H₂S, que se cruza com vias inflamatórias, a biologia vascular e a neurobiologia. Por isso, a CTH é frequentemente estudada em modelos de estresse oxidativo, disfunção metabólica e lesão tecidual, para esclarecer como o fluxo de enxofre modula o estado celular e as redes de sinalização.

CTH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cth sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CTH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cth em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cth, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CTH. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cth nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CTH no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CTH em células tumorais com expressão de Cth silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.