Plásmido CRISPR de Activación (m2) CTDSPL2: sc-435953-ACT-2

El gen murino Ctdspl2 codifica CTDSPL2, una fosfatasa dependiente de Mg2+ de la familia de las haloácido deshalogenasas (HAD) que contribuye a la desfosforilación de serinas/treoninas fosforiladas y al control transcripcional mediante la regulación de la dinámica de fosforilación del dominio C-terminal de la ARN polimerasa II. CTDSPL2 se vincula a las transiciones de estado celular al modular la señalización dependiente de la fosforilación y los programas de expresión génica que influyen en la progresión del ciclo celular, la diferenciación y el compromiso de linaje, integrándose con vías que gobiernan la regulación transcripcional asociada a la cromatina. La desregulación de la actividad fosfatasa del CTD y de los circuitos transcripcionales relacionados se ha asociado con fenotipos oncogénicos y del desarrollo, lo que convierte a Ctdspl2 en un locus útil para diseccionar redes transcripcionales impulsadas por la fosforilación en modelos de enfermedad. La edición génica de Ctdspl2 en células de ratón respalda estudios de genómica funcional sobre el control de la fosforilación del CTD, las relaciones fosfatasa-sustrato y los cambios posteriores del transcriptoma relevantes en contextos de proliferación y diferenciación.

CTDSPL2 El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ctdspl2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CTDSPL2 El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ctdspl2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ctdspl2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CTDSPL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ctdspl2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CTDSPL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CTDSPL2 en células tumorales con expresión de Ctdspl2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.