Plásmido Doble Nickase (h) CSB: sc-401287-NIC

ERCC6 codifica la proteína humana del síndrome de Cockayne B (CSB), un factor similar a una helicasa de ADN dependiente de ATP de la familia SWI2/SNF2 que acopla la transcripción a la reparación por escisión de nucleótidos. CSB es fundamental en la NER acoplada a la transcripción al detectar lesiones que detienen a la ARN polimerasa II, coordinar la remodelación de la cromatina y reclutar la maquinaria de reparación para restablecer la elongación transcripcional. Más allá de la TC-NER, CSB contribuye a la estabilidad del genoma mediante funciones en las respuestas al daño oxidativo del ADN, la gestión del estrés replicativo y la homeostasis mitocondrial. La alteración de la función de ERCC6 se asocia con el síndrome de Cockayne y fenotipos neurodel desarrollo y progeroides relacionados, lo que convierte a CSB en un nodo clave para estudiar la señalización del daño en el ADN y los defectos de reparación asociados a la transcripción.

CSB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ERCC6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ERCC6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ERCC6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ERCC6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.