Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
CRY1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400946-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CRY1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CRY1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CRY1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CRY1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CRY1: sc-393466
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CRY1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400946-NIC | 20 µg | $410.00 |
CRY1 (Cryptochrom, circadianer Regulator 1) kodiert eine zentrale Komponente der zirkadianen Uhr von Säugetieren, die innerhalb der transkriptionell‑translationalen Rückkopplungsschleife wirkt und die durch CLOCK–BMAL1 vermittelte Genexpression reprimiert. Durch die Zusammenarbeit mit PER‑Proteinen und assoziierten regulatorischen Komplexen trägt CRY1 zur Koordination der rhythmischen Kontrolle von Stoffwechsel, Zellzyklus‑Timing, DNA‑Schadensantworten und endokriner Signalgebung in verschiedenen Geweben bei. Eine veränderte CRY1‑Aktivität oder ‑Expression wird mit Störungen des zirkadianen Rhythmus und nachgeschalteten Effekten auf die Schlaf‑Wach‑Regulation sowie die metabolische Homöostase in Verbindung gebracht; entsprechend wird CRY1 häufig im Kontext uhrgesteuerter transkriptioneller Netzwerke untersucht. Diese Eigenschaften machen CRY1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um zu erforschen, wie zeitliche Regulation die Zellphysiologie und die Anpassung an Stress prägt.
CRY1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CRY1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CRY1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CRY1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CRY1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.