CRTAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405828

概要

CRTAP（cartilage associated protein）は、P3H1/LEPRE1およびシクロフィリンB（PPIB）も含むプロリン3-ヒドロキシル化複合体の一員である、小胞体（ER）局在性タンパク質をコードします。この複合体は、線維性コラーゲンの翻訳後修飾、折りたたみ、品質管理を協調的に制御し、細胞外マトリックスの組み立てと結合組織の恒常性を支えます。CRTAPの機能は、シャペロン依存的な折りたたみやプロテオスタシス監視などを含むERタンパク質恒常性経路とコラーゲン生合成を結び付けています。CRTAP活性の喪失は、コラーゲン成熟およびマトリックス構築の異常を特徴とする劣性遺伝の骨形成不全症や関連する骨格異形成と関連しています。

CRTAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCRTAP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CRTAP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CRTAPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CRTAPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CRTAPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CRTAP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CRTAPの機能に不可欠なCRTAPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CRTAPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CRTAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCRTAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CRTAP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CRTAP HDRプラスミド（h）および CRTAP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCRTAPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCRTAP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。