Plasmide CRISPR d'Activation (h) CRTAP: sc-405828-ACT

CRTAP (protéine associée au cartilage) est un composant du réticulum endoplasmique du complexe d’hydroxylation en 3 des prolines, qui collabore avec P3H1/LEPRE1 et PPIB/cyclophiline B pour modifier et jouer un rôle de chaperon auprès des collagènes fibrillaires naissants. En régulant le traitement post‑traductionnel du collagène, CRTAP favorise le bon repliement de la triple hélice, la sécrétion et l’assemblage de la matrice extracellulaire, ce qui l’inscrit dans les voies de biosynthèse du collagène et de protéostasie du RE. Une altération ou une diminution de la fonction de CRTAP perturbe l’homéostasie des tissus conjonctifs et est impliquée dans des dysplasies squelettiques héréditaires, notamment des formes récessives d’ostéogenèse imparfaite. Par conséquent, CRTAP est largement étudiée en biologie de la matrice, dans la différenciation des ostéoblastes et des chondrocytes, ainsi que dans les mécanismes de stress du RE associés à une maturation anormale du collagène.

CRTAP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CRTAP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CRTAP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CRTAP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CRTAP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CRTAP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CRTAP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CRTAP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CRTAP dans les cellules tumorales présentant une expression de CRTAP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.