Plásmido CRISPR de Activación (h) CRTAC1: sc-404534-ACT

CRTAC1 (proteína ácida del cartílago 1) codifica una proteína secretada asociada a la matriz extracelular, enriquecida en el cartílago y otros tejidos conectivos, donde contribuye a las interacciones célula–matriz y a la organización estructural del tejido. CRTAC1 se ha vinculado con la diferenciación de condrocitos y con procesos de homeostasis de la matriz que se entrecruzan con vías de adhesión y remodelación de la matriz extracelular. Se han descrito alteraciones en la expresión de CRTAC1 en afecciones musculoesqueléticas y degenerativas de las articulaciones, lo que la convierte en un marcador útil para estudiar la biología del cartílago y la remodelación del tejido conectivo. In vitro, la modulación de CRTAC1 puede facilitar trabajos mecanísticos sobre la composición de la matriz, fenotipos de adhesión celular y programas transcripcionales relevantes para la integridad del cartílago.

CRTAC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CRTAC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CRTAC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CRTAC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CRTAC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CRTAC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CRTAC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CRTAC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CRTAC1 en células tumorales con expresión de CRTAC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.