Plásmido CRISPR de Activación (h) CRSP77: sc-402693-ACT

MED17 codifica CRSP77, una subunidad central del complejo Mediator humano que conecta factores de transcripción específicos de secuencia con la ARN polimerasa II para coordinar el inicio de la transcripción y la regulación génica específica del promotor. Mediante la integración, dependiente de Mediator, de señales de señalización, CRSP77 contribuye al control de los programas del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas transcripcionales al estrés. La desregulación de componentes de Mediator, incluido MED17, se ha asociado con alteraciones en la homeostasis transcripcional global y se ha explorado en el contexto de mecanismos de enfermedad neurodel desarrollo y proliferativos. Como resultado, MED17/CRSP77 se estudia con frecuencia para comprender cómo los corre reguladores transcripcionales moldean redes de expresión génica específicas de vías.

CRSP77 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MED17 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CRSP77 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MED17 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MED17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CRSP77. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MED17 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CRSP77 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CRSP77 en células tumorales con expresión de MED17 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.