Plasmide Double Nickase (m) CRMP-4: sc-423605-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) CRMP-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CRMP-4 Double Nickase (m) et le plasmide CRMP-4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dpysl3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CRMP-4 Antibody (LL-5): sc-100323
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) CRMP-4 | sc-423605-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) CRMP-4 | sc-423605-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dpysl3 code la protéine médiatrice de la réponse aux collapsines 4 (CRMP-4), une phosphoprotéine cytosolique qui relie les signaux de guidage extracellulaires au remodelage intracellulaire du cytosquelette dans les neurones. CRMP-4 participe à la signalisation sémaphorine/neuropiline–plexine et à la régulation en aval de la dynamique des microtubules, de la croissance axonale et de l’effondrement du cône de croissance, via un contrôle dépendant de la phosphorylation de processus associés à la tubuline et à l’actine. Dans les tissus murins, l’expression de DPYSL3 et son état de modification ont été associés à des programmes de neurodéveloppement et à un remodelage des neurites dépendant de l’activité, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la formation des circuits neuronaux et de la polarité neuronale. Une dérégulation de la signalisation de la famille CRMP a été reliée à des mécanismes impliqués dans la neurodégénérescence et les réponses aux lésions, ce qui en fait un point d’entrée moléculaire utile pour des recherches en biologie des maladies centrées sur des voies de signalisation.
CRMP-4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dpysl3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dpysl3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dpysl3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dpysl3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.