Plasmide Double Nickase (h) CRM1: sc-400348-NIC

XPO1 code pour CRM1, un récepteur d'export nucléaire dépendant de RanGTP qui reconnaît les signaux d'export nucléaire riches en leucine et assure le transport directionnel de protéines et de certains ARN à travers le complexe du pore nucléaire. L'export dépendant de CRM1 contrôle la localisation subcellulaire de régulateurs clés de la transcription, de la progression du cycle cellulaire, des réponses au stress et de la signalisation de l'immunité innée, en s'intégrant à la dynamique du cycle de Ran et aux voies de transport nucléaire. Une activité dérégulée de CRM1 perturbe le trafic nucléocytoplasmique de suppresseurs de tumeurs et de facteurs de signalisation, et une altération de la fonction de XPO1/CRM1 a été associée à des programmes oncogéniques, à des interactions virus–hôte et à des mécanismes de maladies neurodégénératives. Ces caractéristiques font de XPO1 un nœud central pour l'étude du contrôle du transport nucléocytoplasmique et de ses effets en aval sur l'expression génique et la protéostasie.

CRM1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus XPO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de XPO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de XPO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de XPO1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.