CRISP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419035

Panoramica

Crisp1 codifica la proteina secretoria ricca di cisteina 1 (CRISP-1), membro della superfamiglia CAP (proteine secretorie ricche di cisteina/antigene 5/proteina 1 correlata alla patogenesi), altamente espressa nel tratto riproduttivo maschile e secreta nel lume dell’epididimo. Nel topo, CRISP-1 si associa agli spermatozoi durante la maturazione epididimale e contribuisce alle interazioni tra gameti, inclusa la regolazione della capacitazione spermatica e la partecipazione al legame tra spermatozoo e zona pellucida e ad eventi correlati alla fecondazione. A livello cellulare, CRISP-1 è collegata alla biologia della via secretoria e alle interazioni proteiche extracellulari che modulano le proprietà di membrana e di segnalazione degli spermatozoi. La disregolazione di Crisp1 è rilevante negli studi sui fenotipi di fertilità maschile e sulla funzione del tratto riproduttivo, ed è anche utilizzata come modello per comprendere i ruoli delle proteine della famiglia CAP in contesti mucosali e immuno-correlati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CRISP-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Crisp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Crisp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Crisp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CRISP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Crisp1 per lo studio della segnalazione di CRISP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Crisp1 critici per la funzione di CRISP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Crisp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CRISP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CRISP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Crisp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CRISP-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CRISP-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Crisp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Crisp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.