CPTI-M Double Nickaseプラスミド (h): sc-401456-NIC

CPT1Bは、カルニチン・パルミトイルトランスフェラーゼ1B（CPTI-M）をコードしています。CPTI-Mは筋肉に関連するミトコンドリア外膜酵素で、長鎖アシルカルニチンを生成してミトコンドリアへ取り込ませ、その後のβ酸化へつなげる反応（速度制限段階）を触媒します。CPTI-Mは脂肪酸のミトコンドリアマトリックスへの流入を制御することで、脂質分解（脂質異化）、エネルギー恒常性、脂肪酸とグルコースの基質切り替えを調節し、AMPKシグナル、PPARにより駆動される代謝関連の転写プログラム、ならびにマロニルCoAによる脂肪酸フラックス制御と統合的に機能します。CPT1Bの活性や発現の変化は、脂肪酸酸化の破綻、脂質毒性ストレス、代謝リモデリングと関連づけられており、これは心代謝表現型や筋のエネルギー動態に関係する可能性があります。研究の文脈では、CPT1Bはミトコンドリア機能、アシルカルニチンプロファイリング、酸化能、栄養状態に応じた代謝適応といった観点から検討されることが一般的です。

CPTI-M ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CPT1B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CPT1B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CPT1Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CPT1Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。