CPSF6 Double Nickase Plasmid (h): sc-404919-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CPSF6 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CPSF6 Double-Nickase-Plasmid (h) und CPSF6 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CPSF6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CPSF6: sc-376228
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CPSF6 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CPSF6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CPSF6 (Cleavage and Polyadenylation Specificity Factor 6) ist ein zentraler Bestandteil des CFIm-Komplexes, der die 3′-Endverarbeitung von Prä‑mRNAs mitbestimmt, indem er die Auswahl von Poly(A)-Stellen und die alternative Polyadenylierung reguliert. Durch die Kopplung von Spaltung/Polyadenylierung mit Transkription und Spleißen trägt CPSF6 zur mRNA-Reifung, zur Stabilität von Transkripten und zu Genexpressionsprogrammen bei, die den Zellzustand prägen. CPSF6 ist zudem an RNA-bindende und nukleare Exportprozesse angebunden und wurde mit Wirt–Pathogen-Interaktionen in Verbindung gebracht, einschließlich des nuklearen Eintritts von HIV‑1 und der Steuerung von Integrationsstellen. Eine Fehlregulation der 3′-Endverarbeitung und der alternativen Polyadenylierung, die mit der Funktion von CPSF6 verknüpft ist, geht in unterschiedlichen menschlichen Zelltypen mit veränderter onkogener Signalgebung und krankheitsrelevantem Umbau des Transkriptoms einher.
CPSF6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CPSF6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CPSF6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CPSF6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CPSF6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.