CPS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403519

Übersicht

CAD kodiert einen multifunktionalen zytosolischen Enzymkomplex, der die ersten irreversiblen Schritte der de-novo-Pyrimidinbiosynthese katalysiert; dabei initiiert CPS2 (Carbamoylphosphat-Synthetase 2) die Umwandlung von Glutamin und Bicarbonat in Richtung UMP-Produktion. Diese Aktivität unterstützt die Homöostase der Nukleotidpools, die für DNA-Replikation, RNA-Transkription und die Synthese von Membranphospholipiden erforderlich ist, und verknüpft die CAD-Funktion damit mit dem Fortschreiten des Zellzyklus und metabolischer Anpassung. CAD wird durch Nährstoff- und Wachstums-Signalwege reguliert, unter anderem durch allosterische Kontrolle durch PRPP und Feedback-Hemmung durch UTP, und wird durch Phosphorylierung nachgeschaltet an MAPK-/mTOR-Signale moduliert. Eine dysregulierte Pyrimidinmetabolisierung und veränderte CAD-Aktivität wurden mit proliferativen Phänotypen und metabolischer Umprogrammierung in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was CAD zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Nukleotid-Stressantworten und der Aufrechterhaltung der Genomstabilität macht.

Das CPS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CAD-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CAD-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CAD nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CPS2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CAD-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CPS2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CAD-Exone abzielen, die für die CPS2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CAD-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CPS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CPS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CAD-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CPS2 HDR-Plasmid (h) und CPS2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CAD-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CAD-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.