CPS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403519

概要

CADは、多機能な細胞質酵素複合体をコードしており、de novoピリミジン生合成における最初の不可逆（コミット）段階を触媒します。CPS2（カルバモイルリン酸合成酵素2）は、グルタミンと重炭酸からUMP産生へ向かう変換を開始します。この活性は、DNA複製、RNA転写、膜リン脂質合成に必要なヌクレオチドプールの恒常性を支え、CADの機能を細胞周期進行および代謝適応と結び付けています。CADは、PRPPによるアロステリック制御やUTPによるフィードバック阻害を含む栄養・増殖シグナル経路によって調節され、MAPK/mTORシグナル下流のリン酸化によっても制御されます。ピリミジン代謝の破綻やCAD活性の変化は、複数の疾患状況でみられる増殖性表現型や代謝リプログラミングと関連づけられており、ヌクレオチド枯渇（ストレス）応答やゲノム維持を研究するうえで有用な結節点となります。

CPS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCAD遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CAD内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CADのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CPS2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CPS2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CAD欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CPS2の機能に不可欠なCADエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CADゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CPS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCPS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CAD遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CPS2 HDRプラスミド（h）および CPS2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCADホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCAD標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。