Plasmide CRISPR d'Activation (h) CPEB4: sc-413379-ACT

Le CPEB4 humain (cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4) est un régulateur se liant à l’ARN qui contrôle la polyadénylation cytoplasmique, la stabilité des ARNm et la traduction via la reconnaissance des séquences CPE dans les 3′ UTR. En coordonnant des programmes d’expression génique post-transcriptionnels, CPEB4 influence la progression du cycle cellulaire, la plasticité neuronale et les réponses adaptatives au stress, et s’articule avec des réseaux de signalisation qui remodèlent la production traductionnelle lors de la différenciation et de défis métaboliques. Une expression ou une activité dérégulée de CPEB4 a été associée à une protéostasie altérée et à des signatures d’expression génique aberrantes en cancérologie, dans des contextes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi qu’à des phénotypes inflammatoires. Ces propriétés font de CPEB4 un nœud utile pour disséquer des régulons d’ARN, des mécanismes de contrôle traductionnel et des reconfigurations au niveau des voies dans des conditions pertinentes pour la maladie.

CPEB4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CPEB4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CPEB4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CPEB4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CPEB4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CPEB4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CPEB4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CPEB4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CPEB4 dans les cellules tumorales présentant une expression de CPEB4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.