Plasmide Double Nickase (h) CPEB: sc-402685-NIC

CPEB1 code la protéine de liaison aux éléments de polyadénylation cytoplasmique (CPEB), un régulateur se liant à l’ARN qui contrôle la longueur de la queue poly(A) des ARNm et le moment de leur traduction en reconnaissant des éléments de polyadénylation cytoplasmique dans les régions 3′ non traduites (3′ UTR). En coordonnant une traduction dépendante de la polyadénylation, CPEB1 contribue à des programmes de régulation génique post-transcriptionnelle qui façonnent la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la plasticité synaptique neuronale. L’activité de CPEB1 s’articule avec des voies de signalisation qui modulent la dynamique des granules d’ARN et la traduction locale, influençant le remodelage du protéome en réponse à des signaux développementaux et de stress. Une dérégulation du contrôle translationnel médié par CPEB1 a été associée à des états de prolifération et de différenciation altérés, et a été étudiée dans le contexte de la biologie du cancer et des neurosciences, où la régulation de l’ARN est fréquemment perturbée.

CPEB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CPEB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CPEB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CPEB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CPEB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.