Plásmido Doble Nickase (h) COX5b: sc-405159-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)COX5b consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa COX5b (h) y el plásmido de doble nickasa COX5b (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a COX5B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: COX5b Anticuerpo (C-5): sc-374416
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) COX5b | sc-405159-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) COX5b | sc-405159-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COX5B codifica la subunidad 5B de la citocromo c oxidasa (COX5b), un componente del complejo IV mitocondrial codificado en el núcleo que ayuda a regular la transferencia de electrones desde el citocromo c al oxígeno y favorece una fosforilación oxidativa eficiente. Al contribuir al bombeo de protones y al potencial de membrana mitocondrial, COX5b influye en la producción de ATP, el equilibrio de especies reactivas de oxígeno y la adaptación metabólica bajo condiciones variables de oxígeno y nutrientes. La función de COX5B se entrecruza con vías de biogénesis mitocondrial y control de calidad, incluyendo el ensamblaje de la cadena respiratoria y la mitofagia, que son centrales en las respuestas celulares al estrés. Las alteraciones de la actividad del complejo IV y la disfunción mitocondrial asociada a COX5B se han vinculado con defectos bioenergéticos observados en múltiples contextos de enfermedad, incluidos fenotipos neuromusculares y neurodegenerativos, donde el rendimiento mitocondrial condiciona la supervivencia y la diferenciación celular.
COX5b El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COX5B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COX5B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COX5B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COX5B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.