COX5b Double Nickaseプラスミド (h): sc-405159-NIC

COX5Bは、シトクロムc酸化酵素サブユニット5B（COX5b）をコードする遺伝子であり、ミトコンドリア複合体IVを構成する核コード因子の一つです。COX5bは、シトクロムcから酸素への電子移動の調節に関与し、効率的な酸化的リン酸化を支えます。プロトンポンプ機能やミトコンドリア膜電位の維持に寄与することで、COX5bはATP産生、活性酸素種（ROS）のバランス、ならびに酸素や栄養条件が変動する環境下での代謝適応に影響します。COX5Bの機能は、呼吸鎖の組み立てやマイトファジーを含むミトコンドリア生合成・品質管理経路とも交差しており、これらは細胞のストレス応答の中核を成します。複合体IV活性の変化やCOX5Bに関連するミトコンドリア機能障害は、神経筋疾患や神経変性疾患など複数の病態でみられるバイオエネルギー異常と関連づけられており、ミトコンドリア機能が細胞の生存や分化を制約する場面で重要となります。

COX5b ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COX5B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COX5B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COX5Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COX5Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。