Cox-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400072-ACT

PTGS2 kodiert die Cyclooxygenase-2 (Cox-2), ein induzierbares, mit dem endoplasmatischen Retikulum und der Kernhülle assoziiertes Enzym, das Arachidonsäure in Prostaglandin H2 umwandelt – den festgelegten Vorläufer für verschiedene Prostanoide. Cox-2 wird durch entzündliche Zytokine, Wachstumsfaktoren und onkogene Stimuli rasch hochreguliert und integriert Signale aus NF-κB-, MAPK/ERK-, JAK/STAT- und AP-1‑Signalwegen, um entzündliche Genprogramme zu modulieren. Über Prostaglandin E2 und verwandte Lipidmediatoren beeinflusst PTGS2 den Gefäßtonus, die Thrombozytenfunktion, Schmerz- und Fieberreaktionen, den Umbau epithelialer Barrieren sowie die Rekrutierung von Immunzellen. Eine fehlregulierte PTGS2-Expression wird häufig bei chronischer Entzündung und in mehreren Krebszusammenhängen beobachtet, wo sie mit veränderter Zellproliferation, angiogener Signalgebung und Mechanismen der Immunevasion in Verbindung steht.

Cox-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PTGS2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cox-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PTGS2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PTGS2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cox-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PTGS2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cox-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cox-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PTGS2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.