copine 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406621

概要

CPNE1は、Ca²⁺シグナルに応答して膜へのリクルートやタンパク質間相互作用を担うC2ドメインおよびAドメインを含む、カルシウム依存性リン脂質結合タンパク質であるコパイン1（copine 1）をコードします。コパイン1は、カルシウムフラックスを形質膜やエンドメンブレン区画における空間的に制限された相互作用へと結び付けることで、膜輸送、細胞骨格リモデリング、シグナル伝達の協調に関与すると示唆されています。報告されている機能的関連としては、受容体連動型シグナル伝達や細胞ストレス応答の調節があり、その下流で増殖・遊走・分化プログラムに影響を及ぼします。CPNE1の発現や活性の破綻は、カルシウムシグナルと膜ダイナミクスの変化が病的表現型に寄与する腫瘍生物学やその他の疾患と関連付けられており、疾患モデルにおける機序解明研究で重要な標的となります。

copine 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCPNE1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CPNE1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CPNE1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、copine 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、copine 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CPNE1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• copine 1の機能に不可欠なCPNE1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CPNE1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• copine 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcopine 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CPNE1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  copine 1 HDRプラスミド（h）および copine 1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCPNE1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCPNE1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。