Plásmido Doble Nickase (h) connexin 43: sc-400241-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)connexin 43 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa connexin 43 (h) y el plásmido de doble nickasa connexin 43 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GJA1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: connexin 43 Anticuerpo (F-7): sc-271837
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) connexin 43 | sc-400241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) connexin 43 | sc-400241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **GJA1** codifica la conexina 43 (Cx43), una proteína principal de las uniones comunicantes (gap junctions) que se ensambla en conexones hexaméricos para formar canales intercelulares que permiten el intercambio directo de iones y pequeños metabolitos. A través de la comunicación intercelular mediada por uniones comunicantes, Cx43 regula el acoplamiento eléctrico, la señalización de calcio, la homeostasis tisular y las respuestas coordinadas al estrés, con funciones destacadas en la conducción cardíaca, la reparación de heridas y el establecimiento de patrones durante el desarrollo. La conexina 43 se controla de manera dinámica mediante tráfico y recambio dependientes de fosforilación, lo que la vincula con vías que involucran PKC, MAPK/ERK y la remodelación del citoesqueleto. La alteración de la expresión de GJA1 o de la función del canal se ha asociado con fenotipos arritmogénicos, deterioro de la reparación tisular y cambios relacionados con el cáncer en la comunicación célula–célula y la invasión.
connexin 43 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GJA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GJA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GJA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GJA1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.