connexin 26 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420565

概要

Gjb2 は、ギャップ結合タンパク質であるコネキシン26（Cx26）をコードしており、Cx26 は6量体のコネキソンを形成して集合し、細胞間チャネルを構築することで、イオンや小分子代謝産物の直接的なやり取りを可能にします。Cx26 は電気的および代謝的カップリングを協調させることにより、組織恒常性、上皮バリア機能、ならびにストレスや分化シグナルに対する細胞応答の同期を支えます。コネキシン26は、カルシウムシグナル伝達、酸化還元（レドックス）バランス、そして接触依存的な増殖・アポトーシス制御に関連する過程に関与します。Gjb2 機能の破綻は、症候群性および非症候群性の難聴と強く関連しており、また、ギャップ結合を介した細胞間コミュニケーションの変化が病態に寄与する表皮分化異常の疾患にも関与するとされています。

connexin 26 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGjb2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gjb2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gjb2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、connexin 26タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、connexin 26シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gjb2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• connexin 26の機能に不可欠なGjb2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gjb2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• connexin 26 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびconnexin 26 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gjb2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  connexin 26 HDRプラスミド（m）および connexin 26 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGjb2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGjb2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。