COL8A2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403831-ACT

COL8A2 は VIII 型コラーゲンの α2 鎖をコードしており、細線維を形成しない短鎖型コラーゲンとして、細胞外マトリックス（ECM）の組織化や基底膜関連構造の形成に寄与します。眼組織では角膜内皮およびデスメ膜に豊富に存在し、マトリックスの組み立て、細胞接着、ならびに生体力学的な健全性を支えます。COL8A2 に関連するマトリックスのリモデリングは、インテグリン介在性接着や ECM ターンオーバーを含む、細胞‐マトリックス間シグナル伝達を制御する経路と相互に関わります。COL8A2 の遺伝的変異や発現制御の破綻は角膜内皮ジストロフィーと関連づけられており、ECM 恒常性と内皮細胞機能を研究するうえで重要な標的です。

COL8A2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COL8A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

COL8A2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COL8A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOL8A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性COL8A2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOL8A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCOL8A2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOL8A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCOL8A2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。