Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL6A1 (h): sc-401069

Présentation

COL6A1 code la chaîne alpha 1 du collagène de type VI, un composant central des microfibrilles de collagène VI qui s’assemblent au sein de la matrice extracellulaire et contribuent à la résistance mécanique des tissus ainsi qu’à l’adhésion cellule–matrice. Les réseaux de collagène VI coordonnent l’organisation de la matrice extracellulaire et influencent la mécanotransduction, les voies de signalisation de survie et la différenciation cellulaire dans les tissus conjonctifs, avec des liens fonctionnels avec les voies médiées par les intégrines et la stabilité de la membrane basale. Une altération de l’expression de COL6A1 ou de son incorporation dans la matrice peut perturber le remodelage de la matrice extracellulaire et l’architecture stromale, affectant l’intégrité des fibres musculaires et le comportement des fibroblastes. La dérégulation du collagène VI a été associée à des phénotypes neuromusculaires et du tissu conjonctif, et est également étudiée dans le contexte de la fibrose et du remodelage matriciel associé aux tumeurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL6A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COL6A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COL6A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COL6A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL6A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COL6A1 pour l'étude de la signalisation de COL6A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COL6A1 essentiels à la fonction de COL6A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COL6A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL6A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COL6A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COL6A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL6A1 plasmide HDR (h) et le COL6A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COL6A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COL6A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.