COL6A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401069

概要

COL6A1は、細胞外マトリックス内で組み立てられるコラーゲンVIマイクロフィブリルの中核構成要素であるコラーゲンVIα1鎖をコードしており、組織の引張強度や細胞―マトリックス接着に寄与します。コラーゲンVIのネットワークは細胞外マトリックスの構築を協調的に制御し、結合組織におけるメカノトランスダクション、生存シグナル、細胞分化に影響を与えます。また、インテグリン介在性経路や基底膜の安定性とも機能的に関連しています。COL6A1の発現やマトリックスへの取り込みが変化すると、細胞外マトリックスのリモデリングや間質の構築が乱れ、筋線維の完全性や線維芽細胞の挙動に影響を及ぼし得ます。コラーゲンVIの制御異常は、神経筋および結合組織の表現型と関連づけられているほか、線維化や腫瘍関連のマトリックス・リモデリングの文脈でも研究されています。

COL6A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCOL6A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、COL6A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、COL6A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、COL6A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、COL6A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、COL6A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• COL6A1の機能に不可欠なCOL6A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、COL6A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• COL6A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCOL6A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、COL6A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  COL6A1 HDRプラスミド（h）および COL6A1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCOL6A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCOL6A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。