COL4A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419744

概要

Col4a2 は、IV型コラーゲン（COL4A2）のα2鎖をコードしており、基底膜を構成する主要な構造要素の一つです。COL4A2 は他のIV型コラーゲン鎖とヘテロ三量体ネットワークを形成して組織構築を支えます。この細胞外マトリックスの足場は、細胞接着・遊走・極性を制御するとともに、血管の安定性や臓器発生に関与するインテグリンおよび増殖因子経路とのシグナル相互作用を形成します。COL4A2 機能の変化は基底膜の脆弱化や小血管病変と関連しており、脳血管の健全性、眼の発生、腎糸球体のろ過障壁に関する研究で重要です。マウスモデルでは、Col4a2 は内皮細胞や上皮細胞の挙動に影響するマトリックス駆動型メカニズムを解明するための扱いやすい切り口となります。

COL4A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCol4a2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Col4a2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Col4a2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、COL4A2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、COL4A2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Col4a2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• COL4A2の機能に不可欠なCol4a2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Col4a2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• COL4A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCOL4A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Col4a2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  COL4A2 HDRプラスミド（m）および COL4A2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCol4a2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCol4a2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。