Plásmido Doble Nickase (h) COL3A1: sc-400356-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)COL3A1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa COL3A1 (h) y el plásmido de doble nickasa COL3A1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a . Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: COL3A1 Anticuerpo (B-10): sc-271249
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) COL3A1 | sc-400356-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) COL3A1 | sc-400356-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL3A1 codifica la cadena pro-α1 del colágeno tipo III, un colágeno fibrilar principal que se ensambla en fibras de la matriz extracelular y ayuda a determinar la distensibilidad del tejido y su resistencia a la tracción. El colágeno tipo III es abundante en las paredes vasculares, la piel, el pulmón y los órganos huecos, donde coordina la organización de la matriz con la señalización célula–matriz a través de integrinas y de enzimas de remodelación de la MEC. La función de COL3A1 se relaciona con el ensamblaje de la matriz extracelular, programas fibrogénicos regulados por TGF-β y procesos de reparación de heridas que modulan la activación de fibroblastos y la mecanotransducción. La expresión o la estructura desregulada de COL3A1 se asocia a fenotipos de fragilidad del tejido conectivo y vascular, y se estudia con frecuencia en la remodelación asociada a fibrosis y en el recambio de la matriz extracelular.
COL3A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de . Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de . Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.