COL2A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400359-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das COL2A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- COL2A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und COL2A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf COL2A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: COL2A1: sc-52658
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
COL2A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400359-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL2A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400359-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL2A1 kodiert die α1‑Kette von Kollagen Typ II, einem wichtigen fibrillären Kollagen im hyalinen Knorpel und in der sich entwickelnden Wirbelsäule. Sein Aufbau in der extrazellulären Matrix unterstützt die Differenzierung von Chondrozyten, die Gewebebiomechanik und die Kollagenfibrillogenese und integriert sich in proteoglykanreiche Netzwerke, um die Knorpelintegrität zu erhalten. Die Expression und Prozessierung von COL2A1 steht in Wechselwirkung mit Signalwegen des Matrixumbaus, einschließlich der Regulation durch SOX9‑gesteuerte chondrogene Programme und Rückkopplungen durch Signalgebung der TGF‑β‑Familie. Genetische Varianten oder eine fehlregulierte COL2A1‑Funktion sind mit erblichen Skelettdysplasien und knorpeldegenerativen Veränderungen im Zusammenhang mit Arthrose assoziiert, weshalb COL2A1 ein häufiges Ziel in der muskuloskelettalen und extrazellulärmatrixbezogenen Forschung ist.
COL2A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des COL2A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von COL2A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die COL2A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit COL2A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.