COL18A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402281

概要

COL18A1はコラーゲンXVIII（18型コラーゲン）をコードしており、基底膜に関連するマルチプレキシン型コラーゲンとして、細胞外マトリックス（ECM）の組織化や組織の区画化に寄与します。C末端領域がプロテアーゼによって切断・プロセシングされることで、内皮細胞の挙動や血管新生シグナルを、ヘパラン硫酸プロテオグリカンやインテグリンとの相互作用を介して調節する生理活性断片であるエンドスタチンが産生されます。基底膜の完全性維持と血管恒常性における役割を通じて、COL18A1は細胞接着、遊走、ならびに発生や創傷修復過程のリモデリングを形作る微小環境由来のシグナルに影響を与えます。COL18A1の遺伝学的破綻は発生異常や眼症状と関連し、血管新生、線維化、腫瘍微小環境の生物学といった文脈で頻繁に研究されています。

COL18A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCOL18A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、COL18A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、COL18A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、COL18A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、COL18A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、COL18A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• COL18A1の機能に不可欠なCOL18A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、COL18A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• COL18A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCOL18A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、COL18A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  COL18A1 HDRプラスミド（h）および COL18A1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCOL18A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCOL18A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。