COL17A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419738

概要

Col17a1は、膜貫通型コラーゲンであり、基底ケラチノサイトを下層の基底膜に固定するヘミデスモソームの中核構成要素でもあるコラーゲンXVII型α1（COL17A1）をコードします。COL17A1はラミニン-332およびインテグリン複合体と相互作用し、表皮の接着、基底膜の構築、ならびに皮膚付属器の恒常性維持を支えます。また、そのエクトドメインの制御されたシェディング（切断・放出）は、ケラチノサイトの遊走や創傷に伴うリモデリングに影響します。マウス組織においてCOL17A1は、真皮―表皮接合部での上皮の完全性とメカノトランスダクションに寄与し、細胞外マトリックス由来のシグナルを細胞骨格の安定性へと結び付けます。COL17A1機能の破綻は、皮膚脆弱性、水疱形成表現型、毛包サイクル、炎症に関連した上皮バリア障害の研究に広く関与します。

COL17A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCol17a1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Col17a1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Col17a1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、COL17A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、COL17A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Col17a1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• COL17A1の機能に不可欠なCol17a1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Col17a1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• COL17A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCOL17A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Col17a1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  COL17A1 HDRプラスミド（m）および COL17A1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCol17a1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCol17a1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。