Plasmide CRISPR d'Activation (h) COL17A1: sc-402747-ACT

Le gène humain **COL17A1** code le collagène de type XVII alpha 1, un collagène transmembranaire des hémidesmosomes (BP180) qui ancre les kératinocytes basaux à la membrane basale en reliant des composants de la matrice extracellulaire aux filaments intermédiaires de kératine intracellulaires. Il soutient l’adhérence épidermique, l’intégrité de la jonction dermo-épidermique et l’homéostasie des tissus épithéliaux, en influençant des processus tels que la signalisation cellule–matrice, la stabilité mécanique et le remodelage associé à la cicatrisation. La fonction de COL17A1 est étroitement liée aux voies d’assemblage des hémidesmosomes et d’organisation de la membrane basale, avec des effets en aval sur le maintien de la barrière épithéliale. Une expression dérégulée de COL17A1 ou une altération de son intégrité structurale est associée à des phénotypes cutanés bulleux et à des pathologies dermatologiques liées à des autoantigènes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’adhérence épithéliale et de la biologie de la peau.

COL17A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COL17A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COL17A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COL17A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COL17A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COL17A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COL17A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COL17A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COL17A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de COL17A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.