COL12A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402361

概要

COL12A1 は、細胞外マトリックスに局在し、I 型コラーゲン線維と結合する「三重らせんが部分的に中断された線維関連コラーゲン（FACIT）」である XII 型コラーゲン α1 鎖をコードします。COL12A1 は、線維性コラーゲンを他のマトリックス成分と連結することで、組織の引張強度、メカノトランスダクション、ならびに細胞周囲マトリックスの組織化に寄与し、細胞接着や遊走に影響を与えます。その機能は、発生や修復の過程で間質（ストローマ）構築を形作る細胞外マトリックスのリモデリング経路や、インテグリン介在性シグナル伝達と密接に関連しています。COL12A1 の発現異常やバリアントは、遺伝性結合組織の表現型や筋骨格系の機能障害に関与するとされており、マトリックス駆動性の疾患メカニズムを研究する上で有用な標的です。

COL12A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCOL12A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、COL12A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、COL12A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、COL12A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、COL12A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、COL12A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• COL12A1の機能に不可欠なCOL12A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、COL12A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• COL12A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCOL12A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、COL12A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  COL12A1 HDRプラスミド（h）および COL12A1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCOL12A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCOL12A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。