Cofilin 2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401512-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cofilin 2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cofilin 2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cofilin 2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CFL2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cofilin 2: sc-166958
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cofilin 2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401512-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cofilin 2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401512-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CFL2 kodiert Cofilin 2, ein aktinbindendes Protein, das den Umsatz von Filamenten reguliert, indem es das Durchtrennen (Severing) und die Depolymerisation von F‑Aktin fördert und so die für Kontraktilität und Zellmorphologie erforderliche Zytoskelettdynamik formt. In quergestreifter Muskulatur unterstützt Cofilin 2 die Organisation der Sarkomere und den Erhalt der Myofibrillen durch eine koordinierte Kontrolle des Aktin-Remodelings und der Aktin-Myosin-Interaktionen. Die Aktivität von CFL2 ist in Aktin-Signalnetzwerke downstream von GTPasen der Rho-Familie sowie in phosphoregulatorische Signalwege eingebunden, die die Stabilität von Aktinfilamenten feinabstimmen. Störungen der CFL2-Funktion wurden mit neuromuskulären und myopathischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die durch eine veränderte myofibrilläre Architektur gekennzeichnet sind, was CFL2 für Studien zur Muskelhomöostase und zu zytoskelettassoziierten Krankheitsmechanismen relevant macht.
Cofilin 2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CFL2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CFL2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CFL2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CFL2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.