Plásmido CRISPR de Activación (h) CNTF: sc-402471-ACT

El CNTF humano (factor neurotrófico ciliar) es una citocina secretada de la familia de la IL-6 que favorece la supervivencia neuronal, la diferenciación y las respuestas al estrés en los sistemas nerviosos central y periférico. El CNTF señaliza principalmente a través del complejo receptor CNTFRα/LIFR/gp130 para activar las vías JAK/STAT, con participación adicional de las rutas MAPK/ERK y PI3K/AKT, lo que influye en el crecimiento de neuritas, la biología glial y el diálogo cruzado inflamatorio. Las alteraciones en la expresión de CNTF y en la actividad de su vía se han estudiado en la neurodegeneración, la lesión retinal y en contextos desmielinizantes o neuropáticos, donde el soporte trófico y la gliosis reactiva moldean fenotipos asociados a la enfermedad. Modelos in vitro e in vivo emplean la modulación de CNTF para investigar programas de neuroprotección, interacciones neurona–glía y redes transcripcionales vinculadas a la regeneración y al estrés metabólico.

CNTF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CNTF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CNTF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CNTF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CNTF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CNTF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CNTF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CNTF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CNTF en células tumorales con expresión de CNTF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.