CNP-53 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403527

Descripción general

NPPC codifica el péptido natriurético de tipo C, y la isoforma CNP-53 es un péptido secretado bioactivo que señala principalmente a través del receptor 2 del péptido natriurético (NPR2/guanilil ciclasa B) para elevar el cGMP intracelular. Esta vía regula la osificación endocondral y la homeostasis del cartílago, modula el tono vascular y la función endotelial, e influye en la actividad de los fibroblastos y en la remodelación de la matriz extracelular. La señalización CNP/NPR2 se entrecruza con las redes de MAPK y de óxido nítrico–cGMP, configurando programas de proliferación y diferenciación en tipos celulares mesenquimales y vasculares. La actividad desregulada de NPPC se ha asociado con fenotipos de la placa de crecimiento y del desarrollo esquelético, así como con procesos cardiometabólicos y fibróticos relevantes para el modelado de enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CNP-53 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NPPC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NPPC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NPPC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CNP-53.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NPPC para la investigación de la señalización de CNP-53, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NPPC críticos para la función de CNP-53
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NPPC para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CNP-53 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CNP-53 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NPPC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CNP-53 (h) y el plásmido HDR CNP-53 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NPPC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NPPC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.