ClpP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424769

概要

Clppは、ミトコンドリアのATP依存性カゼイン分解ペプチダーゼのプロテアーゼサブユニットであるClpP（セリンプロテアーゼ）をコードしており、ClpXアンフォルダーゼと協働して損傷したタンパク質や誤って折りたたまれたタンパク質を除去し、マトリックス内のプロテオスタシスを維持します。この品質管理軸は、酸化的リン酸化能を支えるとともに、タンパク質毒性および酸化ストレスを抑制し、ミトコンドリア unfolded protein response（mtUPR）シグナル伝達にも影響します。ClpP活性は、エネルギー代謝、ミトコンドリア生合成、ならびにストレス適応的な転写プログラムを制御する経路と結び付いています。CLPP機能の破綻はミトコンドリア機能障害の表現型と関連付けられており、神経変性、代謝疾患、がんに伴うミトコンドリアリプログラミング（再配線）のモデルでしばしば検討されています。

ClpP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるClpp遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Clpp内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Clppのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ClpPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ClpPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Clpp欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ClpPの機能に不可欠なClppエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Clppゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ClpP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびClpP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Clpp遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ClpP HDRプラスミド（m）および ClpP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはClppホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のClpp標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。