CLN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422390

概要

Ppt1は、パルミトイル化タンパク質チオエステラーゼ1（CLN1）をコードしている。CLN1はリソソームに局在する脱パルミトイル化酵素であり、S-パルミトイル化タンパク質からチオエステル結合した脂肪酸アシル基を除去することで、それらの分解（ターンオーバー）や細胞内輸送を促進する。リソソームのプロテオスタシス、膜タンパク質のリサイクリング、脂質の取り扱いを制御することを通じて、CLN1は神経細胞の恒常性を支え、オートファジー‐リソソーム経路とも交差する。CLN1活性の喪失は神経セロイドリポフスチン症（NCL）の病態と関連しており、これはリソソーム分解の障害と、分裂しない組織での貯蔵物質の蓄積を特徴とする。マウス系では、Ppt1の攪乱は、脱パルミトイル化の破綻がシナプス維持、神経炎症シグナル、ならびにリソソーム依存的な品質管理にどのように影響するかを解析するための扱いやすいモデルとなる。

CLN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpt1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppt1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppt1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CLN1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CLN1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppt1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CLN1の機能に不可欠なPpt1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppt1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CLN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCLN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppt1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CLN1 HDRプラスミド（m）および CLN1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpt1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpt1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。