CLK4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419690

概要

Clk4はCDC様キナーゼ4（CLK4）をコードしており、セリン／アルギニンに富む（SR）スプライシング因子をリン酸化する二重特異性キナーゼとして、pre-mRNAスプライシングと転写プログラムの協調に寄与します。SRタンパク質の活性を調節することで、CLK4は細胞周期の進行、分化、ストレス応答性遺伝子発現に影響する選択的スプライシングの選択に関与します。CLKファミリーのシグナル伝達は、プロテオーム多様性を形成するRNAプロセシング・ネットワークと交差しており、スプライシング制御の異常は実験モデルにおいて、がん化（腫瘍性形質転換）や神経発達に関わる表現型と関連づけられることが一般的です。マウス系では、Clk4を撹乱することにより、スプライソーム関連のリン酸化ダイナミクスが組織特異的な転写産物アイソフォームおよび下流経路の出力にどのように影響するかを解析するための扱いやすい手段が得られます。

CLK4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるClk4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Clk4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Clk4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CLK4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CLK4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Clk4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CLK4の機能に不可欠なClk4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Clk4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CLK4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCLK4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Clk4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CLK4 HDRプラスミド（m）および CLK4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはClk4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のClk4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。