CLIP-170 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425158

概要

Clip1 は、微小管プラス端追跡タンパク質である CLIP-170 をコードしており、動的な微小管先端を細胞皮質の部位やオルガネラに連結することで、細胞内輸送と細胞構築の協調を担います。CLIP-170 は、微小管重合の制御、有糸分裂時のキネトコア‐微小管結合、ならびにダイニン／ダイナクチンや他の +TIP ネットワークとの相互作用を介した小胞・タンパク質複合体の輸送に関与します。これらの役割を通じて、Clip1 は細胞極性化、細胞移動、紡錘体構築などの過程に寄与し、これらは増殖や神経発生の文脈でしばしば破綻します。CLIP-170 依存経路に関連する微小管ダイナミクスの変化や染色体分配精度の低下は、疾患モデルにおけるゲノム不安定性や細胞骨格機能不全に結びつく機序の研究において重要です。

CLIP-170 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるClip1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Clip1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Clip1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CLIP-170タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CLIP-170シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Clip1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CLIP-170の機能に不可欠なClip1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Clip1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CLIP-170 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCLIP-170 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Clip1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CLIP-170 HDRプラスミド（m）および CLIP-170 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはClip1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のClip1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。