CLIC4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403188-ACT

ACKR3 (CXCR-7) kodiert einen atypischen Chemokinrezeptor, der CXCL12/SDF-1 und CXCL11 bindet und primär als Liganden-„Scavenger“ sowie als Modulator der Signalübertragung fungiert, statt als klassischer, Gαi‑gekoppelter chemotaktischer Rezeptor. Durch die Formung von Chemokingradienten und Rezeptor‑Crosstalk beeinflusst CXCR-7 CXCR4‑abhängige Programme für Migration, Überleben und Adhäsion und wirkt sich auf nachgeschaltete Signalwege aus, darunter MAPK/ERK sowie β‑Arrestin‑assoziierte Signalgebung. In menschlichen Geweben trägt ACKR3 zur Dynamik des Gefäß- und Immunzell‑Traffickings bei und wird häufig in Kontexten wie Entzündung, Tumorzellinvasion, Metastasierungsbiologie und Angiogenese untersucht. Auch in Entwicklung und Gewebeumbau wird seine Expression und Aktivität erforscht, wenn die Verfügbarkeit von Chemokinen limitierend für die Zellpositionierung ist.

CLIC4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CLIC4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CLIC4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CLIC4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CLIC4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CLIC4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CLIC4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CLIC4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CLIC4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CLIC4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.