CLIC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402391-NIC

CLIC1 kodiert den intrazellulären Chloridkanal 1, ein metamorphes Protein, das entweder als löslicher zytosolischer Faktor vorliegen oder mit Zellmembranen assoziieren kann, um die Chloridleitfähigkeit, das Redox-Gleichgewicht und die Regulation des intrazellulären pH-Werts zu beeinflussen. Es wurde mit der Regulation des Zellvolumens, der Zytoskelettdynamik und des vesikulären Transports in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext von Reaktionen auf oxidativen Stress und inflammatorischer Signalübertragung untersucht. Es wurde berichtet, dass sich Aktivität und Expression von CLIC1 während der Aktivierung von Immunzellen und der zellulären Transformation verändern, was die Untersuchung seines Beitrags zu Programmen der Proliferation, Migration und des Überlebens unterstützt. Eine Dysregulation von CLIC1 wurde mit mehreren pathologischen Kontexten assoziiert, darunter Krebsbiologie und Neuroinflammation, wodurch es sich als nützliches Ziel zur Aufklärung stressadaptiver und der Ionenhomöostase zugrunde liegender Signalwege eignet.

CLIC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLIC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLIC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLIC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLIC1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.