CLEC-2D CRISPR Activation Plasmid (h): sc-412035-ACT

CLEC2D kodiert für CLEC-2D, einen C‑Typ-Lektin-ähnlichen Liganden, der auf der Zelloberfläche präsentiert wird und die Immunerkennung durch Interaktionen mit NK‑Zellrezeptoren moduliert, insbesondere mit NKG2D und CD161 (KLRB1). Indem CLEC-2D aktivierende und inhibitorische Signale an der immunologischen Synapse mitprägt, beeinflusst es die Zytotoxizität von NK‑Zellen, die Freisetzung von Zytokinen sowie die umfassendere Immunüberwachung in entzündlichen und tumorassoziierten Mikroumgebungen. Seine Expression wird dynamisch durch zellulären Stress und Differenzierungszustände reguliert und verknüpft CLEC2D damit mit Signalwegen, die Immunflucht, die Kommunikation zwischen Leukozyten und die Gewebehomöostase steuern. Veränderte CLEC2D-Spiegel wurden bei mehreren Malignomen und immunvermittelten Erkrankungen beschrieben, was seine Nutzung als molekularen Ansatzpunkt zur Untersuchung von Immunescape, antigenunabhängiger Zytotoxizität und immunregulatorischen Phänotypen unterstützt.

CLEC-2D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CLEC2D-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CLEC-2D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CLEC2D-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CLEC2D-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CLEC-2D-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CLEC2D-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CLEC-2D-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CLEC-2D-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CLEC2D-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.