CLC-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403513-NIC

CLCN2 kodiert den spannungsabhängigen Chloridkanal CLC-2, einen Anionenkanal der Plasmamembran, der zur Chloridhomöostase, zur Erregbarkeit der Membran und zur Regulation des epithelialen und neuronalen Ionentransports beiträgt. Die Aktivität von CLC-2 beeinflusst die Kontrolle des Zellvolumens, die transepitheliale Flüssigkeitsbewegung und die elektrische Stabilität durch die Koordination mit anderen Transportern und Kanälen in Prozessen wie dem osmotischen Gleichgewicht und der Barrierefunktion. Eine veränderte CLCN2-Funktion wurde mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die den epithelialen Transport und die Physiologie des Nervensystems betreffen, was seine Relevanz für die Untersuchung von Kanalopathien und der gewebespezifischen Regulation von Ionenflüssen unterstreicht. Als breit exprimierter Kanal wird CLC-2 häufig in Kontexten wie der Epithelphysiologie, der glialen und neuronalen Signalübertragung sowie Mechanismen untersucht, die Ionengradienten mit zellulären Stressantworten koppeln.

CLC-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLCN2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLCN2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLCN2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLCN2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.