claudin-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401756-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- claudin-3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il claudin-3 Double Nickase Plasmid (h) e il claudin-3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CLDN3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: claudin-3 Antibody (1E7): sc-517546
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
claudin-3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401756-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
claudin-3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401756-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **CLDN3** codifica la **claudina-3**, una componente transmembrana a quattro passaggi dei filamenti delle giunzioni serrate (tight junction) che contribuisce a definire la permeabilità paracellulare e l’integrità della barriera epiteliale. La claudina-3 partecipa ai programmi di polarità apico-basale e al dialogo giunzionale con le giunzioni aderenti e con nodi di segnalazione che interagiscono con il rimodellamento del citoscheletro, incluse vie influenzate dalle GTPasi della famiglia Rho e dalla segnalazione dei fattori di crescita. Un’alterata espressione o localizzazione di **CLDN3** è frequentemente osservata nella displasia epiteliale e nei carcinomi, in cui la compromissione delle giunzioni serrate contribuisce a cambiamenti nello stato di differenziazione, a fenotipi associati all’invasività e all’architettura tissutale. **CLDN3** è inoltre rilevante negli studi sulla funzione della barriera mucosale e sull’infiammazione, dove la composizione delle giunzioni modula la permeabilità e l’esposizione del sistema immunitario.
claudin-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLDN3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLDN3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLDN3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLDN3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.