Plasmide Double Nickase (m) claudin-1: sc-419682-NIC

Cldn1 code la claudine‑1, une protéine des jonctions serrées à quatre passages transmembranaires qui contribue à établir la fonction barrière des épithéliums et des endothéliums en régulant la perméabilité paracellulaire et la polarité apico‑basale. La claudine‑1 participe à l’assemblage et au remodelage des jonctions serrées via des interactions avec des protéines d’échafaudage telles que ZO‑1, et s’intègre à des réseaux de signalisation qui coordonnent la stabilité jonctionnelle, notamment par phosphorylation dépendante de la PKC et par des interactions avec les voies Wnt/β‑caténine ainsi qu’avec des programmes liés à la TEM (transition épithélio‑mésenchymateuse). Dans les tissus murins, la claudine‑1 est particulièrement abondante dans les épithéliums formant une barrière, où ses niveaux d’expression influencent l’intégrité des jonctions, la différenciation et les réponses inflammatoires. Une expression altérée de CLDN1 a été associée à une dysfonction de la barrière et à des phénotypes de progression tumorale liés à la TEM et au potentiel métastatique, ce qui en fait une cible utile dans des modèles d’homéostasie épithéliale et de mécanismes pathologiques.

claudin-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cldn1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cldn1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cldn1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cldn1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.